中文名稱：超活核酸酶
英文名稱：Ultra-active Nuclease
產(chǎn)品品牌：Minnebio?
蛋白純度：≥ 99%(SEC-HPLC)
產(chǎn)品貨號(hào)：MBPN01-500LP
產(chǎn)品規(guī)格：500KU
產(chǎn)品描述
Minnebio?超活核酸酶(≥99%) (Minnebio? Ultra-active Nuclease, ≥99%) 是一種來源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)的非特異性核酸內(nèi)切酶，經(jīng)基因工程改造在 Escherichia coli (E. coli)中表達(dá)，通過專利純化過程，在GMP規(guī)范下制備超純級(jí)廣譜核酸酶。它可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進(jìn)行切割，將核酸完全消化成3至5個(gè)堿基長(zhǎng)度的5'-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下 (6 M urea,0.1 M Guanidine HCl,0.4% Triton X-100,0.1% SDS,1 mM EDTA,1 mM PMSF) 降解各種形式的 (雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀、天然或變性) DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。
本品經(jīng)基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表達(dá)純化，純度≥ 99%。不僅可在科學(xué)研究中降低細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白純化效率及功能研究；還可以應(yīng)用在基因治療、病毒純化、疫苗生產(chǎn)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)作為宿主殘留核酸去除試劑。
酶活單位
適量酶和底物經(jīng)過30分鐘培育后導(dǎo)致紫外光在260 nm波長(zhǎng)處吸收△A260改變量為1.0時(shí)所需酶的量（對(duì)應(yīng)于消化37μgDNA的量）被定義為一個(gè)酶活性單位。
運(yùn)輸與保存方法
本產(chǎn)品性質(zhì)及其穩(wěn)定，保質(zhì)期較長(zhǎng)。可在-20℃的含防止冷凍的溶液50%甘油中保存幾個(gè)月，凍干粉可在-20℃下保存1年或80℃下保存數(shù)年。
產(chǎn)品應(yīng)用
本產(chǎn)品用途廣泛，常用于重組蛋白、病毒疫苗等生物制品中去除核酸，符合FDA關(guān)于核酸污染的處理規(guī)程
本產(chǎn)品可以與多種細(xì)胞細(xì)菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量
用于生物分析的樣品制備包括質(zhì)譜、HPLC、ELISA、二維蛋白質(zhì)電泳和印跡分析等。
可以有效防止細(xì)胞治療和疫苗研究中人外周血單核細(xì)胞 (PBMC) 的結(jié)團(tuán)。
超活核酸酶可用于代替樣品超聲處理或其他機(jī)械剪切方法處理DNA。
1、超活核酸酶可用于處理細(xì)胞或組織的提取液,以降解生物樣品中的DNA和RNA，應(yīng)用在病毒純化、疫苗生產(chǎn)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)作為宿主殘留核酸去除試劑，將宿主殘留核酸降 至皮克(pg)級(jí)別從而提高生物制品功效和安全性
2、在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下或者工業(yè)制造過程中,本品用于斷裂DNA鏈,以減少由核酸特別是分子量較大的核酸分子導(dǎo)致的比較大的溶液粘度。該酶與 BacReady- Protein Extraction Solution 和 RIPA LysisBuffer等蛋白抽提試劑配合使用，從而消除粗提物中的核酸，降低粘度。
3、超活核酸酶可用于處理細(xì)胞或組織的提取液,以降解生物樣品中的DNA和RNA,從而進(jìn)一步消除它們對(duì)樣品分析造成的干擾,確保生物分析過程中的靈敏度和準(zhǔn)確性。 用于生物分析的樣品制備包括質(zhì)譜、HPLC、ELISA、二維蛋白質(zhì)電泳和印跡分析等。提高分辨率的分離和提高樣品的回收率。例如：T細(xì)胞反應(yīng)試驗(yàn)需要新鮮分離的細(xì)胞來進(jìn)行最佳的信號(hào)檢測(cè)。然而冷凍的PBMCs (特別是從儲(chǔ)存的血液中制備的PBMCs) 在解凍后往往會(huì)聚集在一起，阻止了進(jìn)一步的分析。核酸酶處理步驟有助于避免由死亡細(xì)胞釋放的DNA導(dǎo)致的細(xì)胞聚集。
4、超活核酸酶在細(xì)胞解凍過程中,可以防止細(xì)胞結(jié)塊。例如冷凍的PBMCs (特別是從儲(chǔ)存的血液中制備的PBMCs) 在解凍后往往會(huì)聚集在一起,結(jié)塊形成沉淀。經(jīng)過超活核酸酶處理后,有助于避免由死亡細(xì)胞釋放的DNA導(dǎo)致的細(xì)胞聚集現(xiàn)象的發(fā)生。
5、酶剪切是利用核酸酶將染色質(zhì)酶切成小片段，可用于DNA結(jié)合蛋白的研究。酶促剪切不需要超聲波處理設(shè)備。酶剪切也比超聲更具侵略性，因此可以保護(hù)感興趣的表位，使其能夠被抗體識(shí)別。超活性核酸酶可用于代替樣品超聲處理或其他機(jī)械剪切處理DNA。
超活核酸酶最佳反應(yīng)條件
在50 mMTris-HCl緩沖液中含有1-2 mM MgCl2, 及在pH 8-9左右和37℃條件下,培育30分鐘能取得最大DNA降解效果。超活核酸酶可以耐受相當(dāng)高濃度的還原劑存在如DTT和變性劑尿素及鹽酸胍等,從而維持良好的結(jié)構(gòu)狀態(tài)和進(jìn)一步保持其超高的活性。因此超活核酸酶在比較寬泛,甚至是極端條件下繼續(xù)發(fā)揮其DNA降解作用。
核酸酶溶液的制備
在凍干粉的小瓶中加入去離子水,使溶液濃度達(dá)到0.2 kU to 1 kU/μL之間。用微量移液管吸取溶液并用移液管槍頭貼著管壁緩慢釋放, 沖洗粘附在在管壁上的核酸酶殘留物。如果溶液量足夠多,也可以蓋住瓶蓋, 輕輕晃動(dòng)瓶子, 甚至顛倒小瓶幾次,最后用離心機(jī)使溶液聚集在瓶底。根據(jù)需要,可以用緩沖液進(jìn)一步稀釋。
凈化用樣品處理
通常在含有1克細(xì)胞的溶液中加入100-500U 的超活核酸酶。在細(xì)胞破碎前加入核酸酶效果更佳。在室溫下?lián)u動(dòng)或輕輕旋轉(zhuǎn)10-20分鐘。根據(jù)需要, 可以進(jìn)一步優(yōu)化酶促反應(yīng),找到最佳酶和底物之間的比例。
生物分析用樣品處理
在超活核酸酶 (50U/100μl) 的存在下,將裝有動(dòng)物組織于緩沖液中的瓶子置于冰上進(jìn)行超聲處理。每15分鐘重復(fù)一次。最后在750g和4℃溫度下離心5分鐘,去除殘留碎片。
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